摘 要：目的：探讨多能性相关转录因子(SOX2)及微管不稳定蛋白(Stathmin)在皮肤鳞状细胞癌(cSCC)组织中的表达及临床意义。方法：收集41例cSCC及25例皮肤良性增生性病变，免疫组化法检测两组病变SOX2、Stathmin蛋白表达水平，分析cSCC患者两种蛋白阳性表达与年龄、性别、病理分化、糖尿病及复发情况的相关性。结果：观察组中SOX2和stathmin蛋白阳性表达率明显高于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组SOX2蛋白表达水平与发病部位和糖尿病史相关，Stathmin蛋白阳性表达与肿瘤病理分化相关，差异有统计学意义(P<0.05)。结论：cSCC中SOX2和Stathmin蛋白高表达，二者可能参与其发生发展，并有望成为cSCC的免疫诊断标记。SOX2表达阳性的cSCC，发病部位和糖尿病史可能为有价值的诊断依据。
关键词：皮肤鳞状细胞癌; cSCC; SOX2; Stathmin;
皮肤鳞状细胞癌(c SCC)是一种以角质细胞异常增殖为特征的恶性肿瘤，其发病率随人口老龄化发展逐年上升。本病临床表现单一、病程长，反复摩擦感染常影响临床判断，不典型的病变，更易过诊或漏诊。研究c SCC早期高危特征和发生的分子机制，可为临床提供重要信息。多能性相关转录因子(SOX2)在哺乳动物胚胎发生和后来的生活中必不可少，异常表达却非常有害，通过调节干细胞功能、细胞黏附、外基质降解及血管生成等参与肿瘤发生、转移与复发[1,2]。微管不稳定蛋白(Stathmin)又称癌蛋白，具有微管解聚活性，在有丝分裂调控中起关键作用，是肿瘤相关因子之一[3]。本研究检测SOX2和Stathmin在c SCC和皮肤良性增生性病变中的表达情况，以期发现相关诊断标记和线索，为临床提供预后信息及新的治疗靶点。
资料与方法
选取2017-2020年北京市密云区医院病理科存档的皮肤鳞状细胞癌切除标本41例为观察组，良性增生性病变25例为对照组。观察组男28例，女13例；年龄44～94岁，平均(70.54±13.19)岁；有糖尿病者21例，无糖尿病者17例(失访3例)；发生于口腔相关上皮者7例，其他部位者34例。对照组男13例，女12例；年龄33～83岁，平均(56.20±14.18)岁；有糖尿病者10例，无糖尿病者15例；发生于口腔相关上皮者1例，其他部位者24例。两组患者基本资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。本研究经医院伦理委员会批准。
纳入标准：(1)术前未接受过放化疗。(2)手术切除为初次治疗。(3)原发性肿物。(4)经患者及家属同意。
排除标准：(1)合并其他恶性肿瘤者。(2)诊断不明确者。(3)复发病例。(4)不配合随访者。
方法：两组均采用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法(SP)。10%中性福尔马林固定的石蜡标本常规切片(厚度2～3μm)，脱蜡水化，磷酸缓冲盐溶液(PBS)浸泡。乙二胺四乙酸(EDTA)修复液(PH8.0)高压修复，冷却至室温，PBS缓冲液清洗。一抗(SOX2：中山金桥，20817571,Stathmin：中山金桥，21095421),37℃孵育1 h。PBS清洗后加酶标羊抗鼠二抗(中山金桥：17G87D11)。DAB显色。苏木素复染。乙醇脱水。二甲苯透明后封片。将已知阳性组织设为阳性对照，PBS液代一抗作为阴性对照。由2名经验丰富的主治医师行独立双盲复阅判读。
观察指标：依据着色强度、阳性细胞百分比进行评分。着色强度：棕褐色计3分，棕黄色计4分，浅黄色计1分，不着色计0分；阳性细胞百分比：>75%计4分，50%～75%计3分，25%～50%计2分，≤25%计1分，无阳性计0分。以上两项得分相加计总分，0～1分为阴性，2～7分为阳性。高分化鳞状细胞癌巢近基底层阳性表达时，评为1分(阴性)。
统计学方法：采用SPSS 22.0统计学分析系统进行数据处理，计量资料用表示，组间采用t检验；计数资料用[n(%)]表示，组间采用χ2检验；以P<0.05为差异有统计学意义。
结果
SOX2和Stathmin蛋白在两组患者中的表达。SOX2蛋白在正常皮肤未见表达，在c SCC中表达于肿瘤细胞核，个别胞质阳性。Stathmin定位于胞质，在正常鳞状上皮基底及基底旁层表达，高分化鳞状细胞癌巢近基底阳性表达，分化越差，信号越强。见图1、图2。
图1 SOX2在癌组织中表达(10x)
图2 Stathmin在癌组织中表达(10x)
两组患者病变中SOX2和Stathmin蛋白表达率比较：观察组SOX2和Stathmin在c SCC阳性表达率明显高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。
表1 两组患者病变中SOX2和Stathmin蛋白表达率比较
观察组SOX2和Stathmin蛋白表达与临床因素的关系：观察组SOX2阳性表达与发病部位和糖尿病史相关，发生于口腔黏膜的鳞状细胞癌SOX2蛋白阳性表达率明显高于其他部位，有糖尿病史的cSCC患者SOX2蛋白阳性表达率高于无糖尿病史者，差异有统计学意义(P<0.05)。Stathmin蛋白阳性表达与肿瘤分化呈负相关，中-低分化鳞癌Stathmin蛋白阳性表达率明显高于高分化者，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。
表2 观察组SOX2和Stathmin蛋白表达与临床因素的关系
讨论
鳞状上皮是表皮增殖单元发生一系列高度调控事件而逐渐分化成熟的，细胞分裂率、凋亡或传输时间等微小改变即可导致病理状况，其调控异常是最可能诱发恶性肿瘤的原因。
SOX2对维持胚胎和干细胞群至关重要，可影响细胞增殖、迁移、侵袭和转移。SOX2在食管鳞癌、膀胱癌前病变及小鼠侵袭性膀胱癌中持续表达，对肿瘤的启动和生长十分重要，推荐SOX2作为尿路上皮癌标记及潜在靶点[4,5]。这与本研究结果所示SOX2蛋白在c SCC细胞核阳性表达，且阳性率明显高于对照组结果相似。SOX2蛋白高表达于口腔相关的鳞状细胞癌，可能与其上皮干细胞性及异质性相关[6]。SOX2还可协同P63形成复合体，激活编码GLUT1的内含子增强子簇，提高GLUT1表达，介导糖酵解内流过度激活，鳞状细胞癌存在其表型，糖代谢异常时高度易感[7]。本研究结果显示，有糖尿病史的c SCC患者SOX2蛋白阳性表达率高于无糖尿病史者，由此推断，患者糖尿病史及血糖水平可作为c SCC诊断参考依据。
几乎所有宫颈鳞癌和高级别上皮内瘤变中Stathmin过表达，其蛋白及m RNA表达水平在食管鳞癌患者血清中高于健康者[8]。但很多研究发现，Stathmin高表达与肿瘤分化差、淋巴结转移、TNM分期晚和生存期短有关[9,10]。口腔鳞癌过表达Stathmin可通过激活PI3K-AKT-m TOR信号通路来降低癌细胞对治疗的敏感性。本研究结果显示，Stathmin在c SCC的阳性表达率明显高于对照组，且其阳性表达与肿瘤分化呈负相关，提示其表达与预后不良相关。
综上所述，Stathmin和SOX2可作为c SCC诊断标记，阳性表达提示恶性，可协助鉴别病理形态相似的c SCC和良性增生性病变，并为临床提供预后信息。患者糖尿病病史及血糖水平有可能作为c SCC的参考依据。
参考文献
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文章名称：多能性相关转录因子及微管不稳定蛋白在皮肤鳞状细胞癌的表达及临床意义
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